科絲美詩素材研究員科普化妝品眼刺激安全性評價方法

基于雞胚絨毛膜尿囊膜的化妝品眼刺激安全性評價

眼刺激

眼刺激，在《化妝品安全技術規范》中的釋義是，眼球表面，包括角膜、鞏膜以及結膜部分，接觸受試物后所產生的可逆性炎性變化。急性眼刺激試驗是用以確定和評價化妝品原料及其產品對哺乳動物的眼睛是否有刺激作用及其程度。

長期以來，皮膚、眼睛刺激性試驗主要依賴動物試驗。家兔的眼刺激試驗（Draize 試驗）自20 世紀 40 年代起作為評價化妝品及其原料眼刺激的主要方法，是很多國家管理機構的毒理學安全性評價常規測試方法之一。但很多研究顯示此方法存在評分系統主觀、實驗室間變異性以及動物外推至人的種屬差異等缺點。

近年來隨著“3Rs”原則（Reduction，減少試驗中使用的動物數量；Refinement，緩解或減輕動物的疼痛和痛苦；Replacement，替代整體動物試驗）的興起，動物福利日趨受到重視，家兔的眼刺激性試驗在倫理上與科學上均受到質疑；近年來，以歐盟為首的全球眾多國家和地區紛紛呼吁禁止在化妝品安全評價中使用動物試驗，積極推動家兔眼刺激性試驗的替代方法研究的發展。

基于雞胚絨毛膜尿囊膜的試驗

這類試驗是利用雞胚絨毛膜尿囊膜（chicken chorioallantoic menbrane，CAM）與人結膜相似的特點開發的替代試驗，以CAM為替代材料研究化妝品的眼刺激性。

01

雞胚絨毛膜尿囊膜試驗(HET-CAM)

試驗方法

以0.3 ml受試物直接加至第10天雞胚氣室底部的CAM，觀察出血、血管溶解和凝血(大中血管內血栓形成或雞胚蛋白混濁)等終點，計算刺激評分(irritation score. IS）

評價標準

預測模型可采用反應時間法(即測定每一種反應終點出現的時間)或刺激閾值法(即測定導致上述毒性終點發生的受試物濃度)。

HET-CAM主要適用于無刺激到輕度刺激物的預測或篩選，對中度以上的刺激物應補充其它實驗確認。適合HET-CAM檢測的化合物包括多種類型液體原料和產品，特別適用于表面活性劑和表面活性劑配方，對固體、不溶性或粘稠物質的測試重復性較差，色素和染料測試應慎重。

02

絨毛膜尿囊膜血管試驗 (CAMVA）

試驗方法

在4日齡受精雞胚上開口，抽取去除約3 mL蛋清，人為造成CAM。第10天時，將不同濃度稀釋的受試物直接暴露于CAM中的“O”形特富龍環，孵育30 min后觀察CAM血管變化，包括出血、充血、鬼影血管等，將使50%的受精雞胚出現反應的受試物濃度（RC50）作為檢測終點。

評價標準

計算使50%的雞胚出現上述損傷的受試物濃度。RC50>3%，無刺激性；RC50≤3%，有刺激性。

CAMVA法適用于輕度到中度眼刺激性化合物的檢測，也可正確區分刺激物和非刺激物，但不能用于嚴重刺激性物質的分類。適于檢測物質的類型同HET-CAM法。

注:①表面活性劑;②除表面活性劑以外的其它可溶性化合物;③固體和粘性難溶化合物

用CAM方法評估特定種類化學品眼刺激性的試驗都顯示了較滿意結果。如Budai等用HET-CAM對6種殺蟲劑的眼刺激性評估結果與Draize試驗結果有很好相關性，僅在刺激分級上有所不同。

基于雞胚絨毛膜尿囊膜的試驗如HET-CAM，CAMVA已獲得歐盟許可，并且一些歐盟國家已將其用于化妝品安全性評價。上海日用化妝品行業協會也出具了相應的團體標準T/SHRH 011-2018 《化妝品眼刺激性/腐蝕性的雞胚絨毛尿囊膜試驗》，上述試驗方法將會在化妝品原料及其產品的安全性評價和濃度篩選中發揮作用，助力化妝品行業的蓬勃發展。

參考文獻

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